泽泻探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

信号检测：扩增过程中荧光强度与产物量成正比，通过Ct值定量起始模板浓度。

高特异性：引物针对泽泻保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL（提供反应体系基础环境） |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含逆转录酶及Taq酶） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL（用于标准曲线稀释） |

| 泽泻特异性引物混合液 | 100μL（优化浓度） |

| 泽泻探针 | 50μL（FAM标记） |

| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段）|

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度）

按10倍梯度稀释阳性对照，独立操作避免污染。

2. RNA提取

自备样品RNA，推荐使用柱式提取法或兼容的RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板/标准品 | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑结果（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

冻融控制：试剂避免反复冻融，使用前短暂离心混匀。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（水）和阳性对照。

安全防护：操作时需穿戴实验服、手套及口罩。

声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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