制草乌探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用TaqMan探针荧光定量PCR核心技术，针对制草乌（Aconitum kusnezoffii Reichb. 炮制加工品）特异性基因片段精准设计引物与探针，可快速、特异、灵敏地定性与定量检测各类样品中的制草乌核酸，有效区分制草乌与乌头属其他近缘物种（如川乌、草乌生品、附子等）及常见混淆中药材，为制草乌药材真伪鉴别、掺伪排查、炮制质量控制及科研检测提供标准化分子生物学解决方案，仅用于科研用途。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对制草乌特异性基因序列设计，避免与其他物种交叉反应。

双重检测功能：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

即用型设计：预混缓冲液与酶混合物，用户仅需提供DNA模板。

质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照，确保结果可靠性。

实验流程

标准曲线制备（定量分析需执行）

标记6管，依次加入45μL专用稀释液，梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），获得10^6–10^1拷贝/μL系列浓度标准品。

每步稀释需更换枪头，冰上静置备用。

样品DNA提取

建议设置阴性（NC，水）和阳性对照（PC，阳性对照1000倍稀释液）。

兼容多数商业DNA提取试剂盒，提取后需测定浓度及纯度（A260/A280≈1.8–2.0）。

qPCR反应体系（20μL/管）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 1 |

| 引物-探针干粉（复溶）| 2 |

| DNA模板 | 2 |

| 无核酸酶水 | 5 |

PCR程序（需优化仪器参数）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 60 sec | 40 |

| 信号采集 | FAM通道（淬灭基团：NFQ） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤39，且有典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40；

灰区（39<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39，否则实验无效。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率差异或运输不当可能影响结果准确性。

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