烟草花叶病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

烟草花叶病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒用于检测烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus, TMV）的RNA，采用探针法荧光定量RT-PCR技术，具有高灵敏度和特异性，适用于科研领域的定性或定量分析。

产品组成

| 成分编号 | 成分名称 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 50/100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针混合液 | 50/100 μL |

| 试剂五 | PCR阳性对照（1×10⁷/1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 使用手册 | 详细操作指南 | 1份 |

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

实验流程

1. 标准曲线样品制备（10倍梯度稀释）

标记6/7个离心管（如7-2号或6-1号）。

每管加入45 μL稀释液，依次用阳性对照进行梯度稀释（如1×10⁸→1×10⁷→…→1×10²拷贝/μL）。

稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。

2. 样品RNA提取

建议设置N+2个样本（含阳性对照PC和阴性对照NC）。

使用兼容的RNA提取试剂盒或本试剂盒配套的核酸释放剂（部分产品提供试用装）。

3. qRT-PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 样品管（N+2） | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 引物-探针混合液 | 2-3 μL | 2-3 μL | 2-3 μL |

| RNA模板/标准品/水 | 5-7 μL | 5-7 μL水 | 5-7 μL标准品 |

4. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 42-50℃ | 10-30 min |

| 预变性 | 94-95℃ | 3-10 min |

| 扩增（40-45循环） | 95℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

待测样本Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39-40间需复测。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免污染。

使用带滤芯枪头，反应液避光保存，避免气泡。

实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒台面及移液器。

所有废弃物按生物安全规范处理。

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