鼠肺炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

鼠肺炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品简介

鼠肺炎病毒（PVM）属于副黏病毒科肺病毒属，可感染小鼠、大鼠等啮齿动物，引起呼吸道疾病。本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量RT-PCR技术，针对PVM高度保守区设计特异性引物及探针，适用于科研领域中对PVM核酸的定性或定量检测，具有高灵敏性、高特异性及宽线性范围（5个数量级）等特点。

检验原理

采用一步法荧光RT-PCR技术，通过逆转录合成cDNA后，利用探针法实时监测扩增过程，荧光信号强度与病毒RNA拷贝数呈正相关。

主要成分

| 成分 | 规格/含量 | 功能说明 |

| 扩增液 | 50μL×1管 | 含逆转录酶、PCR酶等 |

| 反应液 | 950μL×1管 | 含缓冲液、dNTPs等 |

| 阳性质控品 | 5.59×10⁴拷贝/μL×1管 | 用于标准曲线建立及质控 |

| 阴性质控品 | 50μL×1管 | 排除污染及假阳性 |

适用仪器

兼容ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪（需配备FAM通道）。

样本要求

样本类型：组织（1g）、全血（血清）、病毒培养物等。

保存与运输：短期-20℃保存，长期-70℃（≤6个月）；运输需2~8℃冰袋。

操作步骤

样本处理

组织样本：匀浆后离心取上清；血清样本直接取100μL。

RNA提取：推荐使用商品化病毒RNA提取试剂盒。

试剂配制

按比例混合反应液（19μL）与扩增液（1μL），分装至PCR管。

加样

加入5μL模板RNA、阳性质控品或阴性质控品。

PCR扩增

程序设置：

逆转录：50℃ 30min

预变性：94℃ 10min

扩增（40循环）：94℃ 15s → 60℃ 1min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线（阳性质控品梯度稀释）计算样本拷贝数。

定性检测：

阳性：Ct≤36（需典型扩增曲线）；阴性：Ct≥40；

灰区（36<Ct<40）需复测。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

试剂避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

实验废弃物需按生物安全规范处理。

储存条件及有效期

-20℃避光保存，有效期12个月。

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