猪伪狂犬病毒（gB基因）探针法荧光定量PCR试剂盒

猪伪狂犬病毒（gB基因）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，特异性靶向猪伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus, PRV）的gB基因保守序列，适用于科研实验中PRV核酸的定性与定量检测。gB基因为PRV通用型检测靶标，可覆盖疫苗株和野毒株，但不具备区分野毒感染的功能（需配合gE基因检测试剂盒）。

检测原理

通过设计gB基因特异性引物和探针，在PCR扩增过程中，Taq酶切断探针释放荧光信号，实时监测扩增曲线，结合标准曲线计算样本中PRV核酸拷贝数。

试剂盒组分

预混反应液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺等（50次反应，20-25μL/体系）。

引物-探针混合液：gB基因特异性引物及FAM标记探针。

阳性对照：非传染性gB基因DNA片段（10⁷拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

荧光PCR专用模板稀释液（1mL）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输条件：低温干冰或冰袋运输。

性能参数

灵敏度：最低检出限≤10³拷贝/mL。

特异性：不与猪瘟病毒、蓝耳病病毒等常见猪病原体发生交叉反应。

线性范围：定量检测覆盖10¹~10⁶拷贝/μL（5个数量级）。

操作步骤

标准曲线制备：

将阳性对照10倍梯度稀释（10⁶~10¹拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

样本DNA提取：

使用兼容的DNA提取试剂盒，建议设置阴性/阳性提取对照。

qPCR反应体系：

每20μL体系含预混液10μL、引物探针2μL、模板DNA 2μL、水6μL。

扩增程序：

50℃ 10min（逆转录，若需）；

95℃ 10min（预变性）；

95℃ 15sec → 60℃ 60sec（荧光采集，40循环）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：Ct≤39为阳性，Ct≥40为阴性，39<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，反应液避光保存。

实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作台。

废弃物按生物安全规范处理。

公司正在出售的产品