枳实探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法检测枳实特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实现靶序列的定量与定性分析。

产品特点

高灵敏度：优化的引物和探针可检测低至10拷贝/μL的模板。

特异性强：靶向枳实保守序列，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及对照，仅需提供样品RNA。

双重质控：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性。

适用范围：科研用途（非临床）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 反应体系基础液 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准曲线稀释 |

| 枳实引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增 |

| 枳实qRT-PCR探针 | 50 μL | 荧光信号检测 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 质控标准 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（7-2号），依次稀释阳性对照至10²-10⁷拷贝/μL，冰上保存。

2. RNA提取

建议设置N+2样本（含阴/阳性对照），使用兼容的RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

反应体系：

样品管：10 μL缓冲液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探针 + 2 μL引物 + 5 μL RNA模板。

阴性对照：以水替代模板。

标准曲线管：加入梯度稀释液。

反应程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线明显。

阴性：Ct≥40。

可疑（35<Ct<40）：需复测。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，每次更换避免气溶胶污染。

阳性对照需最后加入，单独存放。

废弃物料需经消毒处理（如10%次氯酸钠）。

声明：本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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