紫苏子探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品基本信息

用途：科研专用（定性/定量检测紫苏子DNA）

规格：50次/盒（20μL体系/次）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

运输要求：低温（2~8℃）冰袋运输，避免反复冻融。

试剂盒组分

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应缓冲环境 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 50μL | 含Taq酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及样品制备 |

| PCR引物-探针干粉 | 50T | 特异性识别紫苏子DNA |

| PCR阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线建立及质控 |

检测原理

基于实时荧光定量PCR技术，通过5'核酸外切酶活性水解探针，释放荧光信号（FAM通道检测），实现对靶DNA的定量分析。探针3'端淬灭基团（NFQ）确保高特异性，避免非特异性扩增。

操作步骤

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10^7~10^1拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（6~1号），依次加入稀释液及模板，涡旋混匀后冰上保存。

2. 样品DNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

兼容市售DNA提取试剂盒，纯化后DNA需避免降解。

3. qPCR反应设置

体系：20μL（含2μL模板DNA）

程序：

逆转录：50℃ 10min

预变性：95℃ 10min

扩增（40循环）：95℃ 15sec → 60℃ 60sec（采集荧光）

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，推算样品浓度。

定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；临界值（39~40）需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止交叉污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

防污染措施：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

局限性：

基因突变或提取效率差异可能导致假阴性；

运输保存不当或操作误差可影响检测准确性。

检测局限性声明

本结果需结合其他临床或实验数据综合判断，不可作为唯一诊断依据。

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