紫菀探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法检测紫菀特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。当Taq酶在扩增过程中切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，通过监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对紫菀保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，仅需提供样品RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），可区分假阴性结果。

适用范围：科研用途（非临床），支持定性与定量检测。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR稀释液 | 1mL | 标准曲线样品稀释 |

| 引物混合液 | 100μL | 紫菀特异性引物 |

| 荧光探针 | 50μL | 靶序列特异性探针 |

| 阳性对照 | 50μL (10^8拷贝/μL) | 质控标准品 |

实验步骤

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒制备样本，建议设置阴/阳性对照。

3. qRT-PCR反应

反应体系（20μL）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec，60℃ 1 min，FAM通道采集信号）。

4. 数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需混匀，短暂离心后使用。

阳性对照需最后加入，防止污染其他组分。

本产品仅限科研使用，禁止用于临床诊断。

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