诺如病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

适用于食品表面（如贝类、生食蔬菜、水果）及水体中诺如病毒RNA的定性检测（科研用途），或临床粪便/腹泻物样本的辅助诊断（需注明适用性）。

检测原理

采用实时荧光RT-PCR技术，针对诺如病毒GI、GII或通用型高度保守基因序列设计特异性引物及探针。扩增过程中，探针与靶序列结合后被Taq酶水解，释放荧光信号，通过定量PCR仪实时监测扩增曲线，实现病毒RNA的定性或定量分析。

试剂盒组成

探针法qRT-PCR缓冲液

酶混合液（含逆转录酶和Taq DNA聚合酶）

引物-探针混合液（FAM/HEX/VIC荧光标记）

阳性对照（无传染性DNA片段，1×10^7拷贝/μL）

阴性对照（无RNA酶水）

荧光PCR专用模板稀释液

规格：25T/盒、48T/盒、50T/盒或96T/盒（具体以包装标注为准）。

储存条件及有效期

储存：-20℃以下避光保存，避免反复冻融（冻融≤5次）。

有效期：6个月至1年（生产日期见外包装）。

适用仪器

支持FAM/HEX/VIC通道的荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

LightCycler

Bio-Rad CFX

其他兼容机型

样本要求

食品/环境样本：需提取RNA（如磁珠法或离心柱法）。

临床样本：粪便或腹泻物需冷藏（2-8℃）运输，长期保存需-70℃以下。

操作步骤

1. 样本处理

按RNA提取试剂盒说明书纯化样本RNA，建议设置阴/阳性提取对照。

2. 试剂配制

每反应体系（20-25μL）包含：

缓冲液：10-19μL

酶混合液：1-2μL

引物-探针混合液：3μL

模板RNA：5μL

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50-55℃ | 10-15 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 2-5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 15 sec → 55-60℃ 30-60 sec | 45-50 |

信号采集：55-60℃阶段读取FAM通道荧光。

结果判读

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct值＞45或无Ct值。

灰区（40<Ct≤45）：需重复检测。

质控要求：

阴性对照：无扩增（Ct≥45）。

阳性对照：Ct≤32。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。

防污染：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇消毒。

局限性：

基因变异可能导致假阴性。

交叉污染可能导致假阳性。

非临床用途：部分试剂盒仅限科研使用，临床诊断需结合其他指标。

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