羊布氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本产品为羊布氏杆菌(Brucella melitensis)探针法荧光定量PCR检测试剂盒，采用TaqMan探针技术，可对羊布氏杆菌核酸进行高灵敏度、高特异性的定性或定量检测。本产品适用于科研用途，不用于临床诊断。

产品规格

规格：50T/盒（50次20μL体系反应）

保存条件：-20℃避光保存

有效期：12个月

适用仪器：ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR仪

产品组成

探针法qPCR缓冲液（500μL×1管）

探针法qPCR酶混合液（100μL×1管）

荧光PCR专用模板稀释液（1mL×1管）

羊布氏杆菌探针法qPCR引物混合液（100μL×1管）

羊布氏杆菌qPCR探针（50μL×1管）

羊布氏杆菌探针法qPCR阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，50μL×1管）

产品说明书（1份）

技术原理

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记荧光淬灭基团并被磷酸化。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割与靶序列结合的探针，使报告基团与淬灭基团分离并发出荧光信号，通过检测荧光信号的增长实现对靶序列的定量分析。

产品特点

即开即用：用户只需提供样品DNA模板

高灵敏度：优化的引物和探针设计，检测下限可达10²拷贝/μL

高特异性：引物针对羊布氏杆菌DNA高度保守区设计，不与其它微生物发生交叉反应

双重用途：既可用于定性检测，也可用于定量检测（线性范围达5个数量级）

质控完善：提供阳性对照，便于区分假阴性样品

使用方法

标准曲线样品制备（以10²-10⁷拷贝/μL为例）

标记6个离心管为7、6、5、4、3、2

每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液

在7号管中加入5μL阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品

依次稀释至6号管（1×10⁶拷贝/μL）、5号管（1×10⁵拷贝/μL）等，直至完成6个梯度稀释

所有稀释标准品置于冰上备用

样品DNA制备

建议设置N+2个提取（N为样品数，加1个阳性对照和1个阴性对照）

可使用本试剂盒配套裂解液直接作为PCR模板，或使用其他商业DNA提取试剂盒

PCR反应体系配制（20μL体系）

| 成分 | 样品管(N+2) | 阴性对照 | 标准曲线管(6管) |

| qPCR缓冲液 | 各10μL | 10μL | 各10μL |

| 酶混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |

| 探针 | 各1μL | 1μL | 各1μL |

| 引物混合液 | 各2μL | 2μL | 各2μL |

| 样品DNA | 各5μL | - | - |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

| 标准品 | - | - | 各5μL |

PCR扩增程序

预变性：95℃ 10分钟

扩增循环（40个循环）：

95℃ 15秒

60℃ 1分钟（采集FAM通道荧光信号）

结果分析

定量分析

以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线

根据样品Ct值推算样品DNA浓度

定性分析

阳性：Ct值≤35，且有典型扩增曲线

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线

可疑：35<Ct值<40，需重复检测确认

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样品处理区、扩增区），避免交叉污染

使用带滤芯枪头和专用工作服

阳性对照稀释需在独立区域进行

反应液应避光保存，避免反复冻融（不超过5次）

实验后工作台需用10%次氯酸或75%酒精消毒

所有废弃物应按生物危害物处理

局限性说明

检测结果受样品采集、保存和处理方法影响

病原体基因突变可能导致假阴性

交叉污染可能导致假阳性

不同提取方法效率差异可能影响定量结果

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