猪多杀性巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

猪多杀性巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对猪多杀性巴氏杆菌特异性基因（如kmt1或toxA）设计引物及探针，通过荧光信号扩增实现对病原体核酸的定性检测。检测限低至10 CFU/mL。

试剂组成

核心组分：

反应液（含PCR缓冲体系）

酶液（Taq DNA聚合酶等）

阳性质控品（1×10^8拷贝/μL）

阴性质控品（超纯水或无菌缓冲液）

部分提供引物混合液及MagicMix预混液。

注意事项：不同批号组分不可混用，阳性对照需单独存放以防污染。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦MX3000P/3005P

LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf系列

操作步骤

样本处理：推荐磁珠法或离心柱法提取核酸。

试剂配制：按样本数（N=待测样本+阴阳对照）配制反应体系（20μL/管），含19μL反应液+1μL酶液。

加样：加入5μL模板核酸或对照品，离心混匀。

PCR扩增：

循环参数：95℃ 2min预变性；45循环×（95℃ 15s→60℃ 30s，采集FAM通道信号）。

结果判读：

阳性：Ct≤40，扩增曲线呈指数增长；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认；

阴性：无Ct值或曲线平直。

质控标准

阴性质控：无扩增曲线；

阳性质控：Ct≤32且曲线指数期明显。

局限性

检测结果受样本质量、提取方法、运输保存条件影响；

基因突变可能导致假阴性；

仅限科研或辅助诊断，临床确诊需结合其他指标。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染；

使用一次性耗材，实验后消毒台面及仪器；

反应液避光保存，避免气泡干扰；

废弃物按生物安全规范处置。

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