禽腺病毒（IV型）探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

禽腺病毒（IV型）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，用于禽类样本中IV型禽腺病毒核酸的定性与定量检测。适用于科研用途，如流行病学调查、病毒载量监测及实验室研究。

检验原理

通过设计针对IV型禽腺病毒基因保守区的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，利用实时荧光定量PCR仪监测信号强度，实现核酸的灵敏检测（检测限低至1×10^3拷贝/μL）。

试剂组成

禽腺病毒扩增液（25μL×1管）

禽腺病毒反应液（975μL×1管）

阳性质控品（50μL×1管，含1×10^6拷贝/μL病毒核酸）

阴性质控品（50μL×1管，无核酸酶水）

说明书（1份）

储存条件及有效期

-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

适用仪器

兼容ABI系列、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。

自备耗材与设备

无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL离心管）

滤芯吸头（10μL/200μL/1000μL）

离心机、振荡混匀器、移液器

样本要求

样本类型：

活体样本：全血、血清、粪便、呼吸道/肛门拭子。

病死禽：肠道组织、肝脏等。

保存与运输：

短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）。

运输需使用2~8℃冰袋，避免反复冻融。

操作步骤

1. 核酸提取

推荐使用商品化病毒DNA提取试剂盒，提取后模板保存于-15℃以下。

2. 试剂配制

解冻试剂后混匀离心，按N（样本数+2质控）计算反应体系：

反应液：19.5μL/管

扩增液：0.5μL/管

分装至PCR管，加入5μL模板DNA（样本/质控）。

3. PCR扩增

程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集荧光）

4. 数据分析

定量检测：以标准曲线（Ct值-log浓度）计算病毒载量。

定性检测：

阳性：Ct≤36，典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40；

可疑值（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36。

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