鼠李糖乳杆菌HN001探针法荧光定量PCR试剂盒

鼠李糖乳杆菌HN001探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光探针靶向鼠李糖乳杆菌HN001的保守基因序列（如repa基因和ferritin-like domain-containing基因），实现菌株水平的精准鉴定与定量分析。

产品组成

探针法qRT-PCR缓冲液：500μL

探针法qRT-PCR酶混合液：50μL

荧光PCR专用模板稀释液：1mL

PCR引物-探针干粉：50次反应量（针对鼠李糖乳杆菌HN001特异性基因设计）

PCR阳性对照（无传染性DNA片段，10^7拷贝/μL）：50μL

性能特点

高特异性：引物与探针经基因组比对优化，避免与其他微生物DNA交叉反应。

高灵敏度：检测下限低至10拷贝/μL，线性范围覆盖10^1~10^7拷贝/μL。

双重应用：支持定性与定量检测，定量分析时需绘制标准曲线。

兼容性：适配多数荧光定量PCR仪（如ABI 7500、LightCycler480等），无需ROX校正（仪器依赖）。

操作步骤

标准曲线制备

标记6管，依次加入45μL稀释液，梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），获得10^6~10^1拷贝/μL系列浓度标准品。

每步稀释需更换枪头，冰上保存备用。

样品DNA制备

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），PC为阳性对照1000倍稀释液。

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样品DNA。

PCR反应设置（20μL体系）

按比例混合缓冲液、酶液、引物探针及模板DNA。

上机参数：

预变性：95℃ 10分钟

40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样品浓度。

定性检测：Ct≤39判为阳性，≥40为阴性，39~40需复测。

注意事项

分区操作：样品处理、试剂配制、PCR扩增需在不同区域进行，避免污染。

防护措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸钠或75%乙醇消毒台面。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

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