凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

凝结芽孢杆菌BC01探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

即开即用：仅需提供样品DNA模板，操作便捷。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对凝结芽孢杆菌BC01高度保守区优化设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。

内置对照：含阳性对照（10^7拷贝/μL），有效区分假阴性结果。

宽动态范围：定量检测线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

稳定性：试剂经严格验证，批间差异小。

试剂盒组分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | qPCR酶混合液 | 50μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | 引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 试剂五 | 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL |

操作流程

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL），获得6个浓度梯度（10^1–10^6拷贝/μL）。

注意：稀释需在独立区域进行，避免污染。

2. 样品DNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

兼容多数商业DNA提取试剂盒。

3. qPCR反应体系（20μL）

程序设置：

逆转录（若需）：50℃ 10min

预变性：95℃ 10min

扩增（40循环）：95℃ 15s → 60℃ 60s（采集FAM信号）

4. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：Ct≤39为阳性，Ct≥40为阴性；临界值（39–40）需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用带芯枪头、一次性手套，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

保存条件：

试剂：-20℃避光保存，避免反复冻融。

样本：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月）；运输需2–8℃冰袋。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及病原体变异影响。

阳性对照泄漏可能导致假阳性。

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