猪蓝耳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

猪蓝耳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，定性检测猪蓝耳病毒（PRRSV）核酸，适用于血液、血清、肺脏、淋巴结及脾脏等样本的检测，为临床诊断和疗效评估提供辅助依据。

检验原理

通过设计特异性引物和探针，靶向PRRSV基因组保守区域。在PCR扩增过程中，探针与目标序列结合释放荧光信号，经荧光定量PCR仪实时监测，实现病毒核酸的定性分析。

主要组成成分

| 组分 | 规格（50 T/盒） |

| PCR反应液 | 1000 μL ×1管 |

| 阳性对照 | 40 μL ×1管（灭活PRRSV） |

| 阴性对照 | 40 μL ×1管（牛基因组DNA）|

| 说明书 | 1份 |

储存条件及有效期

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

适用仪器

支持ABI系列、Bio-Rad系列、Roche LightCycler 480、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪（FAM通道检测）。

样本要求

血液/血清：无菌采集后离心取上清。

组织样本：取2-3克研磨匀浆，3000 rpm离心10分钟取上清。

保存要求：

立即检测或2-8℃冷藏保存≤24小时；

长期保存需-80℃冻存，避免反复冻融。

检验方法

1. 试剂准备

反应体系配制（每份）：

PCR反应液：20 μL

样本DNA/阳性/阴性对照：5 μL

总反应体积：25 μL/管。

2. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| UNG处理 | 37℃ 2分钟 | 1 |

| 预变性 | 95℃ 5分钟 | 1 |

| 扩增 | 95℃ 5秒 → 55℃ 30秒 | 40 |

信号采集：55℃阶段结束时采集FAM通道荧光信号。

结果判读

阳性：Ct值≤35或出现S型扩增曲线。

可疑：Ct值35-38，需复测确认。

阴性：Ct值＞38或无扩增曲线。

注意事项

实验室规范：需符合基因扩增实验室管理要求，分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

防污染措施：

使用无核酶耗材；

实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒工作台；

废弃反应管需灭菌处理。

操作要点：

避免气泡产生及反应管泄漏；

试剂使用前需充分混匀并瞬时离心；

不同批号试剂不可混用。

性能指标

最低检出限：10³ Copies/mL。

精密度：CV值≤3%。

局限性

低病毒载量样本（＜10³ Copies/mL）可能导致假阴性。

样本处理不当（如RNA降解或交叉污染）可能影响结果准确性。

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