甲基营养型芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒 新品

检测原理

基于探针法荧光定量PCR技术，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针，释放报告基团（如FAM）荧光信号。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比，实现靶标RNA/DNA的定量分析。

产品特点

高灵敏性：引物与探针针对Bacillus methylotrophicus保守序列优化，检测限低至10²拷贝/μL。

高特异性：不与相近菌种或病毒RNA发生交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，用户仅需提供RNA模板。

内控对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），可区分假阴性结果。

应用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

标准曲线制备：

用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），分装至标记离心管（7~2号）。

每管加入45μL稀释液及5μL上一步稀释液，涡旋混匀。

样本RNA提取：

使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阴性（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

qPCR反应体系（20μL）：

| 成分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| RNA模板 | 5μL |

扩增程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，反应液避光保存。

实验后清洁台面（次氯酸或75%乙醇）。

公司正在出售的产品