疙瘩皮肤病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

产品基本信息

规格：50T/盒

用途：科研实验（仅限非临床用途）

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（冻融次数≤7次）。

有效期：12个月（自生产日期起）。

试剂盒组成

探针法qRT-PCR缓冲液（500 μL）

探针法qRT-PCR酶混合液（50 μL）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

PCR引物-探针干粉（50次反应）

PCR阳性对照（1×10^7拷贝/μL，50 μL）

实验操作流程

标准曲线制备

标记6支离心管（编号6至1），每管加入45 μL模板稀释液。

在6号管中加入5 μL阳性对照（1×10^7拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10^6拷贝/μL的标准品。依次梯度稀释至1×10^1拷贝/μL。

稀释后的标准品置于冰上备用。

样品DNA提取

使用兼容的核酸提取方法纯化待测样本DNA，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

qPCR反应体系（20 μL）

定量分析：需设置N+9个反应管（N为待测样本数，含标准曲线、阴/阳性对照）。

反应程序：

逆转录：50℃ 10分钟

预变性：95℃ 10分钟

PCR扩增（40循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线（Ct值vs. log浓度）计算样本拷贝数。

定性检测：

阳性：Ct≤35，且有典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40或无扩增；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质控要求：

阴性对照：Ct≥40或无扩增；

阳性对照：Ct≤35且呈指数扩增。

防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁工作台。

局限性：

基因变异可能导致假阴性；

样本保存不当或运输问题可能影响结果准确性。

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