兔巴氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，保质期12个月。

运输条件：低温运输（-20℃冰袋或干冰）。

用途：科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

基于TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ）。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过实时监测荧光强度（Ct值），结合标准曲线对靶标核酸进行定量或定性分析。

产品特点

高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10拷贝/μL。

高特异性：针对兔巴氏杆菌保守序列设计，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液与酶体系，仅需提供样品RNA/DNA模板。

内控设计：含阳性对照（无传染性DNA片段，10^7~10^8拷贝/μL）和阴性对照。

兼容性：适配常见荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 50~100μL |

| 荧光模板稀释液 | 1mL |

| 引物-探针混合液 | 100μL |

| 阳性对照（DNA片段） | 50μL（10^8拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样品核酸提取

推荐使用柱式病毒RNA/DNA提取试剂盒，设置阴性/阳性提取对照。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板（样品/标准品） | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 10~30 min |

| 预变性 | 95℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 95℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35（或39），扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40，或无扩增曲线。

灰区（35~40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：核酸提取、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每次实验必须包含阴性对照（无模板）和阳性对照。

样本要求：RNA/DNA应避免反复冻融，提取后建议立即检测或-70℃保存。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率或操作误差可能影响定量准确性。

公司正在出售的产品