米曲霉通用型探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

检测原理

基于TaqMan探针技术，通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光报告基团（FAM通道），实现实时定量。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比，通过标准曲线计算模板起始浓度。

产品特点

高灵敏性：检测限低至100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL）。

高特异性：针对米曲霉保守序列设计引物及探针，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，仅需提供样品RNA/DNA模板。

质控完善：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qPCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 米曲霉引物混合液 | 100μL |

| 米曲霉探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

用阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），每个梯度单独使用带芯枪头操作，避免污染。

2. 样品制备

提取样品RNA/DNA，建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照）。

阴性对照：超纯水；阳性对照：试剂盒提供模板。

3. PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| 模板 | 5μL |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35为有效。

注意事项

操作分区进行（试剂准备区、样品处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

标准品稀释需独立操作，防止交叉污染。

反复冻融不超过3次，建议分装保存。

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