基因探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于基因探针法荧光定量PCR技术开发，专用于高灵敏、高特异性的DNA靶标检测。适用于定性或定量分析，线性范围覆盖5个数量级，检测灵敏度可达100拷贝/反应。

产品规格

规格：50次/盒（20μL体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；需低温运输。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等。

试剂盒组分

预混PCR反应液（含优化引物及探针）

荧光PCR专用模板稀释液

阳性对照（无传染性DNA片段，1×10^7拷贝/μL）

使用说明书

检验原理

特异性：引物针对靶基因高度保守区设计，避免交叉反应。

灵敏度：检测下限为100拷贝/反应，提供阳性对照以排除假阴性。

闭管操作：一管式设计降低污染风险。

操作步骤

1. 标准曲线制备（独立区域操作）

使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），标记6管，依次加入稀释液并震荡混匀，冰上保存备用。

2. 样本处理

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照）。

核酸提取：推荐使用兼容的核酸纯化试剂盒，按说明书操作。

3. qPCR反应体系（20μL）

样品管：7μL待测DNA模板 + 10μL预混液 + 2μL引物混合液 + 1μL探针。

阴性对照：以超纯水替代模板。

标准曲线管：加入梯度稀释的标准品。

4. 扩增程序

按仪器说明书设置循环参数（建议：95℃预变性5分钟；95℃ 15秒，60℃ 1分钟，40循环）。

数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性：Ct≤30为阳性，≥35为阴性；30<Ct<35需复测。

注意事项

避免试剂反复冻融，使用前充分离心。

操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），防止污染。

阳性对照需最后加入，避免交叉污染。

质量控制

阴性对照Ct值应≥35，阳性对照Ct值≤30且扩增曲线典型。

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