柯萨奇病毒CVA6型变种探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和探针靶向CVA6变种高度保守区，实现RNA反转录（RT）与扩增（PCR）同步进行。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ），扩增过程中Taq酶切割探针释放荧光信号，通过Ct值定量分析起始模板浓度。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL/950μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶、Taq酶及dNTPs |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 引物-探针混合液 | 50-100μL（干粉或预混液） | 特异性扩增CVA6靶序列 |

| 阳性对照（无传染性） | 50μL（1×10^7~10^8拷贝/μL） | 标准曲线建立及实验质控 |

| 阴性对照 | 50μL（部分品牌提供） | 排除污染及假阳性 |

操作步骤

标准曲线制备（10倍梯度稀释阳性对照，6个浓度点，如10^2~10^7拷贝/μL）。

样本RNA提取：推荐使用兼容性病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性提取对照（NC/PC）。

反应体系配置（20μL/管）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 引物探针混合液3μL + 模板RNA 5μL。

PCR程序：

逆转录：50℃ 10-30分钟 → 预变性：95℃ 10分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 60秒，采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：Ct≤39为阳性，≥40为阴性，39-40间需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免交叉污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且扩增曲线正常。

保存与运输：-20℃保存，冰袋运输（2-8℃），严禁反复冻融。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

提取效率差异或操作不当影响结果准确性。

声明

本产品仅限科研使用，检测结果需结合其他临床指标综合判断。操作人员需具备分子生物学实验经验，严格遵守生物安全规范。

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