水牛泰勒虫染料法荧光定量PCR试剂盒

水牛泰勒虫染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品基本信息

检测技术：染料法荧光定量PCR（SYBR Green I或其他兼容染料）

应用范围：水牛泰勒虫（Theileria buffeli）核酸的定性与定量检测，适用于科研用途，不可用于临床诊断。

规格：50次反应（20μL体系/次）

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（建议冻融次数＜7次），有效期12个月。

试剂盒组成

PCR反应预混液：含优化引物、DNA聚合酶、dNTPs及荧光染料。

阳性质控品：无传染性DNA片段（1×10⁸拷贝/μL）。

阴性质控品：无核酸酶水或缓冲液。

荧光PCR专用模板稀释液：用于标准曲线制备。

说明书及质检报告。

技术参数

灵敏度：≤10拷贝/μL。

线性范围：5个数量级（定量检测）。

特异性：引物针对水牛泰勒虫高度保守区设计，不与常见微生物核酸交叉反应。

实验操作流程

1. 样本准备

待测样本需提取DNA（推荐使用商业化核酸提取试剂盒）。

阳性质控品可直接使用，无需提取。

2. 标准曲线制备（定量检测适用）

将阳性质控品按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个浓度需独立操作以避免污染。

3. PCR反应体系

按20μL体系配制：

预混液10μL

模板DNA 2μL

无核酸酶水补至20μL。

推荐程序：

预变性：95℃ 5分钟

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环）

熔解曲线分析（染料法需验证扩增特异性）。

4. 结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：Ct值≤35且熔解曲线单一峰视为阳性。

注意事项

分区操作：严格区分样本处理区、PCR准备区及扩增区，避免污染。

质控要求：

阳性质控品需出现扩增曲线，阴性质控品无信号。

重复冻融：试剂解冻后需混匀并离心，避免反复冻融影响性能。

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