桃拉综合症病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

桃拉综合症病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，针对桃拉综合症病毒（TSV）高度保守区设计特异性引物，通过实时荧光监测扩增产物，实现病毒核酸的定性和定量检测。

灵敏度：最低检测限100拷贝/反应。

特异性：不与其他生物DNA发生交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖至少5个数量级（10^1~10^5拷贝/μL）。

试剂组成

2×SYBR qPCR MasterMix：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料（0.5mL/管）。

荧光PCR专用模板稀释液：1mL/管（用于标准曲线制备或样本稀释）。

阳性对照：预装TSV特异性靶序列（需用户按需添加）。

自备试剂与仪器

自备试剂：样本DNA提取试剂（推荐磁珠法或离心柱法）。

适用仪器：

ABI 7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler®、Bio-Rad CFX系列、Eppendorf RealPlex等荧光定量PCR仪。

操作步骤

样本处理

使用核酸提取试剂盒提取样本DNA，溶于无核酸酶水中。

反应体系配制（20μL/反应）

混合19μL 2×MasterMix与1μL DNA模板（或对照品）。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 3分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

数据分析

通过标准曲线计算样本中TSV拷贝数，阈值循环数（Ct值）≤35判为阳性。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

阳性对照与样本需分区域操作，防止污染。

实验废弃物需按生物危害材料处理。

质量控制

阴性对照：Ct值应无扩增或≥40。

阳性对照：Ct值需在预期范围内（参考批次说明书）。

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