牛乳头瘤病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

牛乳头瘤病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专为牛乳头瘤病毒（Bovine Papillomavirus, BoPV）的定性及定量检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术，具有高灵敏度和特异性。适用于科研用途，线性定量范围覆盖5个数量级（1×10²~1×10⁷拷贝/μL），每次反应体系为20μL，包装规格可完成50次检测。

试剂盒组成

阳性对照：1×10⁸拷贝/μL BoPV DNA（用于标准曲线制备）。

PCR反应预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料及优化缓冲体系。

DEPC-H₂O：无核酸酶水，用于稀释及空白对照。

注：具体成分以实际包装清单为准。

操作步骤

（一）DNA提取（样本制备区）

使用兼容的核酸提取试剂盒或自选方法纯化样本DNA。

建议设置N+2个提取反应（N为待测样本数，另加阳性对照PC和阴性对照NC）。

PC：10μL阳性对照（1×10⁶拷贝/μL）加水至与样本体积一致。

NC：等体积无核酸酶水。

（二）标准曲线制备（独立区域操作）

标记6管，编号7~2，每管加45μL DEPC-H₂O（使用带芯枪头避免污染）。

梯度稀释：

7号管：加5μL阳性原液（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得1×10⁷拷贝/μL标准品。

依次稀释至2号管（1×10³拷贝/μL），每步更换枪头。

（三）PCR扩增（扩增区）

按20μL体系配制反应液（含DNA模板2μL）。

循环条件：

预变性：95℃ 5分钟；

40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

（四）结果分析

定量检测：根据标准曲线计算样本拷贝数。

电泳验证（可选）：取5-10μL产物于1.5%~2%琼脂糖凝胶电泳，预期条带200bp。

无效判定：若阴性对照出现扩增，表明污染，需重复实验。

注意事项

分区操作：样本制备、扩增及产物分析需严格分区，避免交叉污染。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每次实验需包含PC和NC，确保结果可靠性。

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