人核糖核酸酶P基因探针法荧光定量PCR试剂盒

产品基本信息

规格：50次/盒

用途：科研实验（不可用于临床诊断）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

运输条件：低温冷链运输

试剂盒组分

预混PCR Master Mix（含荧光探针、dNTPs、耐热DNA聚合酶等）

阳性对照：86 bp DNA片段（10^8拷贝/μL，无传染性）

模板稀释液

DNA病毒裂解液试用装（15次用量，兼容多数病毒DNA提取试剂盒）

使用说明书

实验流程

1. 样本DNA制备

使用自选方法或配套试剂（如柱式病毒DNAout）提取样本DNA。

建议设置阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。

2. 阳性对照稀释（标准曲线制备）

按10倍梯度稀释阳性对照（10^2–10^7拷贝/μL），标记6管（7–2号），每步换枪头避免污染。

示例：7号管加入5 μL 10^8拷贝/μL阳性对照至45 μL稀释液，得10^7拷贝/μL，依次类推。

3. qPCR反应体系（20 μL）

反应组分：

预混Master Mix：10 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

仪器适配性：

ABI 7500/7700/7900需添加ROX对照，其他仪器（如Bio-Rad、LightCycler）无需ROX。

4. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 预变性 | 95℃ | 1分钟 |

| 循环（30次）| 95℃ | 15秒 |

| | 60℃ | 15秒 |

| | 72℃ | 15秒 |

5. 数据采集与分析

荧光通道：激发光471 nm，发射光530 nm（结合DNA后）。

定量分析：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样本DNA浓度。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

防护措施：穿戴实验服、手套，使用带滤芯枪头。

质量控制：

阴性对照Ct值≥40，阳性对照Ct值≤36且呈典型扩增曲线。

临界值样本（Ct 36–40）需重复检测。

储存与运输：试剂避光保存，避免反复冻融；运输需干冰或冰袋维持-20℃。

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