塞内卡病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检测原理

本试剂盒基于实时荧光定量RT-PCR技术，针对塞内卡病毒基因组高度保守区域设计特异性引物和探针。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。在PCR扩增过程中，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，实现对病毒RNA的定性和定量检测。

主要组成

RT-PCR反应液：含缓冲液、dNTPs等，规格为437.5 μL（25 T/盒）或875 μL（50 T/盒）。

混合酶液：含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等，规格为62.5 μL（25 T/盒）或125 μL（50 T/盒）。

阳性对照：含塞内卡病毒靶基因的质粒（1×10^8拷贝/μL），40 μL/管。

阴性对照：灭菌纯水，40 μL/管。

说明书：1份。

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 系列（如7500、QuantStudio）

Bio-Rad 系列（如CFX96）

Roche LightCycler 480

Agilent Stratagene MX系列

杭州博日系列等

样本要求

样本类型：血液、血清、肌肉或内脏组织。

处理要求：

液体样本：直接离心取上清。

组织样本：研磨匀浆后离心（3000 rpm，10分钟）取上清。

保存条件：

短期：2-8℃保存不超过24小时。

长期：-80℃冻存，避免反复冻融。

检验步骤

试剂准备

解冻试剂并离心混匀，按反应数（n=样本数+3）配制混合液（每反应含RT-PCR反应液17.5 μL、混合酶液2.5 μL）。

分装20 μL/管至PCR反应管。

样本处理

使用商业化RNA提取试剂盒提取样本RNA。

加样

每反应管加入5 μL样本RNA或对照品，终体积25 μL。

PCR扩增

程序设置：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

结果判读

定量分析：以标准曲线（10^2-10^7拷贝/μL）计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阳性对照需最后添加，防止气溶胶污染。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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