松材线虫探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，通过以下步骤实现检测：

探针设计：探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团，靶序列扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号。

实时检测：通过荧光强度增长与循环阈值（Ct值）的关系，定量起始模板浓度。

适用范围：科研用途（非临床），用于松材线虫（B. xylophilus）DNA的定性及定量检测。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 100μL |

| 模板稀释液 | 1mL |

| 松材线虫引物混合液 | 100μL |

| 松材线虫探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

注：需自备样品RNA提取试剂及超纯水。

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），分装至标记管中，冰上保存。

2. 样品RNA制备

推荐使用柱式RNA提取试剂盒，同时设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/标准品/对照 | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照需有明显扩增曲线。

产品特点

高灵敏度：可检测低至1/80条线虫的DNA。

高特异性：引物及探针针对松材线虫保守序列设计，避免与拟松材线虫交叉反应。

快速检测：全程约1.5小时，无需电泳步骤。

即用型：优化试剂体系，减少操作误差。

注意事项

稀释及加样需在独立区域操作，避免交叉污染。

反应完成后立即分析数据，避免荧光淬灭。

本试剂盒仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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