新型布尼亚病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒适用于血清、组织（心、肝、脾、肺、肾、脑）及全血样本中新型布尼亚病毒RNA的特异性检测，用于临床辅助诊断或科研用途。检测结果需结合临床症状及其他实验室指标综合判断，不可作为唯一诊断依据。

检测原理

采用一步法荧光定量RT-PCR技术，针对新型布尼亚病毒保守基因区域设计特异性引物及TaqMan探针。通过逆转录和扩增反应，实时监测荧光信号，实现对病毒RNA的定性检测。

试剂组成

（50T/盒规格）

反应液：500μL×2管（含引物、探针、dNTPs、缓冲体系）

酶混合液：50μL×1管（逆转录酶、Taq DNA聚合酶）

阳性质控品：50μL×1管（含灭活病毒RNA）

阴性质控品：250μL×1管（无RNA酶水）

注意事项：

不同批号试剂禁止混用。

各组分需按说明书要求保存，避免反复冻融（≤5次）。

储存条件与有效期

储存温度：-20℃±5℃，避光保存。

有效期：12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

安捷伦MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

样本要求

组织样本：取心、肝、脾等组织1g，匀浆后离心取上清。

全血样本：采集2mL，分离血清后取100μL。

保存与运输：短期-20℃保存，长期需-70℃；运输使用2~8℃冰袋，避免反复冻融。

操作步骤

核酸提取

推荐使用磁珠法或离心柱法提取RNA，按提取试剂说明书操作。

反应体系配制（单反应25μL）

| 组分 | 体积 |

| 反应液 | 20μL |

| 酶液 | 1μL |

| 模板RNA | 4μL |

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 42℃ | 20 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 55℃ | 30 sec | |

结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈指数增长。

可疑：35<Ct值≤38，建议复测。

阴性：Ct值>38或无扩增曲线。

质控要求：阴性质控品无Ct值，阳性质控品Ct值≤32。

局限性

样本质量、运输条件或操作误差可能影响结果准确性。

病毒变异可能导致假阴性。

交叉污染风险需严格分区操作。

注意事项

实验需在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

使用一次性耗材，分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离）。

废液及耗材需按生物危害废弃物处理（10%次氯酸或75%乙醇消毒）。

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