病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，适用于病毒核酸的定性与定量检测。采用优化设计的引物和探针，具有高灵敏度和特异性，可有效避免与其他病原体的交叉反应。试剂盒包含预混缓冲液、酶混合物、阳性对照及专用稀释液，支持50次20μL体系的检测反应，仅限科研使用。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品核酸模板（DNA或RNA）。

高灵敏性：引物和探针针对病毒保守序列优化，检测下限可达10^1拷贝/μL。

双重检测模式：支持定性与定量分析，定量线性范围覆盖5个数量级。

内控设计：提供无传染性阳性对照片段，便于区分假阴性结果。

兼容性：与主流核酸提取试剂盒兼容，可搭配柱式提取或免提取释放剂使用。

操作流程

（一）标准曲线制备（定量分析适用）

标记6支离心管（6至1号），每管加入45μL专用模板稀释液。

依次梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），每次稀释后震荡混匀，获得10^6至10^1拷贝/μL的标准品系列。

注：稀释操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

（二）样品核酸提取

建议设置N+2个样本（含阴性对照NC与阳性对照PC）。

使用自选方法提取核酸，或搭配推荐提取试剂盒。

（三）PCR反应体系配制

按以下比例配制20μL反应体系（以定量分析为例）：

探针法qPCR缓冲液：10μL

酶混合液：2μL

探针及引物混合液：各1μL/2μL

模板：5μL（样品/标准品/阴性对照）

离心后立即上机。

（四）扩增程序

逆转录（如为RNA病毒）：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct值≤36（或39，依试剂盒型号），扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

灰区（36-40）：需复检确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制及扩增需在不同区域进行。

污染控制：使用带滤芯枪头，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，保质期12个月。

局限性：检测结果受样本质量、提取效率及病原体变异等因素影响。

包装清单

qPCR缓冲液（500μL）

酶混合液（50μL）

引物-探针干粉（50T）

阳性对照（50μL, 10^7拷贝/μL）

模板稀释液（1mL）

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