大鼠脑源性神经营养因子探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专为大鼠脑源性神经营养因子（BDNF）的核酸定量检测设计，适用于科研用途。试剂盒包含优化的引物-探针组合、阳性对照及反应体系，可实现高灵敏度（检测下限达10拷贝/μL）和高特异性（避免与其他物种DNA交叉反应）的检测。

包装组分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | qPCR酶混合液 | 50 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉 | 50次反应 |

| 试剂五 | 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量检测适用）

稀释阳性对照：以10倍梯度稀释阳性对照（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管：依次标记6管（6至1号），每管加入45 μL稀释液，逐级稀释5 μL阳性对照，涡旋混匀后冰上保存。

2. 样本DNA制备

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样本，建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20 μL）

体系配置：按N+9管配置（N样本+2对照+6标准曲线+1阴性对照）。

加样顺序：依次加入缓冲液、酶混合液、引物-探针、模板DNA（2 μL/管）。

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 10 min |

| 预变性 | 95℃ | 10 min |

| 循环扩增 | 95℃ | 15 sec |

| （40循环） | 60℃ | 60 sec（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 39，扩增曲线典型；

阴性：Ct ≥ 40或无扩增；

灰区（39<Ct<40）：需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域完成，避免交叉污染。

保存条件：试剂-20℃保存，避免反复冻融；运输需使用冰袋（2–8℃）。

质量控制：

阴性对照Ct值应≥40；

阳性对照Ct值≤30且曲线呈S型。

局限性：

样本质量、提取方法及运输条件可能影响结果；

基因突变可能导致假阴性。

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