禽轮状病毒A组探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检测原理

基于探针法荧光定量RT-PCR技术，针对禽轮状病毒A组高度保守基因区域设计特异性引物及探针，通过实时荧光信号扩增实现病毒核酸的定性与定量检测。

灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。

特异性：不与禽类其他病原体核酸发生交叉反应。

线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 50μL（含逆转录酶、Taq酶） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 引物-探针干粉 | 50T |

| 阳性对照（无传染性）| 50μL（10^7拷贝/μL） |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（6–1号），依次加入稀释液与阳性对照，涡旋混匀后冰上保存。

2. 样本处理

核酸提取：推荐使用兼容的DNA提取试剂盒，设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。

PC制备：用阳性对照稀释液模拟样本体积。

3. PCR反应体系（20μL）

每反应包含：10μL缓冲液、0.5μL酶混合液、1μL引物-探针、2μL模板DNA、6.5μL无核酸酶水。

反应程序：

逆转录：50℃ 10分钟

预变性：95℃ 10分钟

PCR循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

结果分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。

定性检测：

阳性：Ct≤39，且扩增曲线典型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑值（39<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、PCR扩增需在独立区域进行，防止污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

保存条件：试剂-20℃避光保存，运输需冰袋（2–8℃），避免反复冻融。

局限性：

突变株可能导致假阴性；

样本质量影响检测准确性。

声明

本产品仅用于科研，不可作为临床诊断依据。操作需符合实验室生物安全规范，废弃物按《微生物实验室生物安全通则》处理。

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