瓜类细菌性果斑病菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

用于检测瓜类细菌性果斑病菌（Acidovorax avenae ssp. citrulli）的核酸，适用于科研领域。该病原体可导致葫芦科作物毁灭性病害，本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，具有高灵敏度和特异性。

试剂盒组成

扩增液：25μL×1管

反应液：975μL×1管

阳性质控品（无传染性DNA片段）：50μL×1管

阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

检验原理

针对病原体保守基因区域设计特异性引物及探针，通过实时荧光PCR扩增检测目标核酸。阳性样本在扩增过程中释放荧光信号，经仪器分析实现定性与定量检测。

操作步骤

样本处理：

使用商品化DNA提取试剂盒（推荐配套试剂）提取样本核酸，避免交叉污染。

短期保存于-20℃，长期保存需-70℃。

试剂配制：

反应体系（20μL/管）：19.5μL反应液 + 0.5μL扩增液。

每批次需设置阴性对照（阴性质控品）和阳性对照（阳性质控品）。

PCR扩增：

仪器参数：

预变性：95℃ 10分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM通道信号）

结果判读

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤39判为阳性，≥40为阴性；临界值（39-40）需复测。

定量检测：通过标准曲线（10^1-10^7拷贝/μL梯度稀释）计算样本浓度。

注意事项

防污染措施：

分区域操作（样本处理、试剂配制、扩增区）。

使用带滤芯吸头及专用耗材。

质量控制：

避免试剂反复冻融，配制后避光保存。

若阳性对照无信号或阴性对照出现扩增，实验无效。

局限性：

结果需结合临床症状及其他检测方法综合判断。

基因突变或提取效率差异可能导致假阴性。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI系列、Bio-Rad、LightCycler等）。

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