人鼻病毒1A探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于人鼻病毒1A（Human Rhinovirus 1A）的定性与定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度和特异性，线性范围达5个数量级，可兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad等）。

试剂盒组成

人鼻病毒1A扩增液：25μL×1管

人鼻病毒1A反应液：975μL×1管

阳性质控品（1×10^8拷贝/μL）：50μL×1管

阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

注：不同批号组分不可混用，包装规格可满足50次20μL体系反应。

储存与运输

保存条件：-20℃±5℃，避光保存，避免反复冻融（≤7次）。

有效期：12个月。

运输要求：低温泡沫箱加冰密封运输，阳性对照需单独存放。

实验前准备

自备材料：

无核酸酶离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）、移液器、离心机等。

样本DNA提取试剂（推荐商品化试剂盒，如病毒基因组DNA提取试剂盒）。

样本要求：

适用样本：全血、血清、呼吸道分泌物、拭子、病毒培养物等。

保存：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融），运输需2~8℃冰袋。

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量分析）

标记6管（7至2号），依次梯度稀释阳性质控品（10^8~10^3拷贝/μL）。

每管加入5μL稀释液，震荡混匀后冰上保存。

2. 样本DNA提取

提取N+2份样本（含阴阳性对照），避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/管）

| 组分 | 体积 |

| 人鼻病毒1A反应液 | 19.5μL |

| 人鼻病毒1A扩增液 | 0.5μL |

| 模板DNA/对照品 | 5μL |

4. 扩增程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15sec | 40 |

| | 55℃ | 30sec | |

5. 结果分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35且呈典型扩增曲线；

可疑：35<Ct≤40，需复测；

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行。

防污染：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

质控要求：

阴性对照：无Ct值或Ct≥40；

阳性对照：Ct≤30且曲线指数增长。

局限性：基因突变或提取效率差异可能导致假阴性。

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