兔出血症病毒2 型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

技术原理

采用TaqMan探针法实时荧光RT-PCR技术，通过特异性引物和探针靶向RHDV2高度保守的VP60基因区域，实现病毒RNA的定性及定量检测。探针5'端标记FAM荧光报告基团，3'端标记BHQ1淬灭基团，通过荧光信号变化判定病毒核酸拷贝数。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针经优化设计，可检测低至10拷贝/μL的病毒RNA，且不与其它病毒RNA发生交叉反应。

双重功能：支持定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

即用型设计：用户仅需提供样本核酸模板，试剂盒包含预混反应液、阳性对照（无传染性DNA片段）及标准曲线样品。

质控完善：提供阳性对照以排除假阴性结果，推荐重复检测临界值样本（CT值36–40）。

试剂盒组分

荧光RT-PCR预混反应液（含酶、dNTPs、缓冲液）

RHDV2特异性引物及探针混合液

阳性对照（1×10^7拷贝/μL DNA片段）

荧光RT-PCR专用模板稀释液

无核酸酶水

说明书

适用样本

组织样本：脾脏、扁桃体、肾脏、淋巴结等病变组织

体液样本：全血、分泌物

操作步骤

样本处理：按病毒RNA提取试剂盒说明书提取样本RNA，反转录合成cDNA。

标准曲线制备：将阳性对照10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），每管取5 μL加入45 μL稀释液，冰上保存。

PCR反应体系：

预混反应液：18 μL

引物探针混合液：2 μL

模板（cDNA或标准品）：2 μL

扩增程序：

95℃预变性3分钟

95℃ 10秒 → 59℃ 10秒 → 72℃ 25秒，共45循环（荧光信号采集于延伸阶段）

结果判读

阳性：CT值≤36且扩增曲线呈S型。

阴性：无CT值或CT≥40。

可疑：36<CT<40，需复检确认。

注意事项

标准品稀释需在独立区域操作，避免污染。

反复冻融≤5次，-20℃避光保存，有效期12个月。

本产品仅限科研使用。

适用仪器

兼容ABI、安捷伦MX3000P/3005P、Bio-Rad等荧光定量PCR仪。

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