立枯丝核菌探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于快速、高灵敏度检测立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）的核酸。适用于科研领域，可对组织、血液、粪便、食品等样本中的病原体进行定性和定量分析。

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA/RNA模板，试剂盒包含预混优化的缓冲液、酶、引物及探针。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对立枯丝核菌保守序列设计，避免交叉反应。

内置对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，便于区分假阴性结果。

宽动态范围：定量检测线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

适配性：兼容多数商业DNA提取试剂盒，支持20μL反应体系，50次检测/盒。

组分清单

| 成分 | 规格 | 保存条件 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | -20℃避光 |

| 酶混合液 | 50 μL | -20℃避光 |

| 模板稀释液 | 1 mL | -20℃ |

| 引物-探针干粉 | 50 T | -20℃干燥 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50 μL | 单独存放，-20℃ |

操作流程

1. 样本制备

样本类型：食品、血液（EDTA抗凝）、粪便、病灶渗出物等。

DNA提取：建议使用商业提取试剂盒，避免交叉污染。

2. 标准曲线制备（定量分析）

取6支离心管，标记为1–6，每管加入45 μL稀释液。

梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），依次获得10^6–10^1拷贝/μL的标准品。

3. PCR反应设置

体系：20 μL/反应（含2 μL模板）。

程序：

逆转录（如适用）：50℃ 10 min

预变性：95℃ 10 min

扩增（40循环）：95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM信号）

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 38或无信号；

可疑（35 < Ct < 38）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

保存与运输：-20℃保存，避免反复冻融；运输需使用冰袋（2–8℃）。

局限性：

检测结果受样本质量、提取效率及病原体变异影响；

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

检测限：≤10拷贝/μL

有效期：12个月（-20℃）

适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

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