鲤浮肿病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

检验原理

采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对鲤浮肿病毒（CEV）基因组保守区域设计特异性引物及荧光探针（FAM标记），通过荧光信号扩增曲线实现对病毒核酸的定性检测。

试剂盒组分

| 组分 | 25T/盒规格 | 50T/盒规格 |

| 反应液 | 500μL×1管 | 500μL×2管 |

| 酶液 | 25μL×1管 | 50μL×1管 |

| 阳性质控品 | 250μL×1管 | 250μL×1管 |

| 阴性质控品 | 250μL×1管 | 250μL×1管 |

注意：不同批号组分不可混用。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

LightCycler®（罗氏）、Bio-Rad CFX、Eppendorf Mastercycler®等。

操作步骤

样本处理

核酸提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取样本RNA/DNA。

试剂配制（按N=样本数+2质控计算）

每反应体系：19μL反应液 + 1μL酶液，分装至PCR管。

加样

加入5μL模板核酸（样本/阴性质控/阳性质控）至反应管，离心混匀。

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 荧光采集 |

| 预变性 | 95℃ | 2min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15sec | 45 | 否 |

| | 60℃ | 30sec | | 是（FAM）|

结果判读

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长。

阴性：无Ct值或扩增曲线平直。

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控标准

阴性质控：无Ct值或扩增信号。

阳性质控：Ct值≤32且曲线指数期明显。

局限性及注意事项

局限性

检测结果受样本质量、运输条件及操作规范性影响。

病毒变异可能导致假阴性。

操作要求

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离）。

使用一次性耗材，避免交叉污染。

实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

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