转基因功能基因Bt探针法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对Bt基因保守区域设计特异性引物及探针。通过实时监测扩增过程中的荧光信号（FAM通道），实现转基因成分的定性与定量分析。

适用领域

农业转基因检测（如Bt棉花、Bt玉米）、食品安全监测、环境微生物研究。

试剂组成

核心组分

Bt扩增液（25μL×1管）

Bt反应液（975μL×1管）

阳性质控品（人工合成DNA片段，50μL×1管）

阴性质控品（50μL×1管）

注意事项

不同批号试剂不可混用；

避免反复冻融（≤7次）。

样品要求

样本类型

转基因作物组织（叶片、种子）、食品加工物（玉米粉、棉籽油残渣）、环境样本。

保存与运输

短期保存：-20℃；长期保存：-70℃（≤6个月）；

运输需使用2~8℃冰袋，禁止反复冻融。

操作步骤

DNA提取

推荐使用商品化提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。

反应体系配制

每反应体系20μL（含19.5μL反应液+0.5μL扩增液）；

加样：5μL模板DNA/质控品。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 3min；

40循环：95℃ 15s → 55℃ 30s（荧光采集）。

结果判读

阳性：Ct≤35.0且扩增曲线指数期明显；

可疑：35.0<Ct≤38.0需复测；

阴性：无Ct值或无明显曲线。

质控标准

阳性质控Ct≤30，阴性质控无扩增。

性能参数

灵敏度：最低检测限1×10³ copies/mL；

特异性：针对Bt基因保守区域，无交叉反应；

精密度：批内/批间CV≤3%。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区）；

使用无核酸酶耗材（吸头、离心管）；

避免荧光探针长时间光照；

检测结果需结合其他方法验证，不可单独用于临床诊断。

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