黄瓜绿斑驳花叶病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量RT-PCR技术，专为检测黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus, CGMMV)而设计。该病毒属于芜菁花叶病毒科烟草花叶病毒属，为正义单链RNA病毒，基因组全长约6325-6440 nt，对葫芦科作物造成严重损害。

产品特点

即开即用设计，用户仅需提供样品RNA模板

优化引物和探针组合，灵敏度可达100拷贝/反应

提供1×10⁷拷贝/μL阳性对照，便于结果判读

高特异性引物设计，基于病毒RNA高度保守区，避免交叉反应

支持定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级

50次20μL反应体系容量

专为科研用途设计

产品组成

探针法qRT-PCR缓冲液

探针法qRT-PCR酶混合液v2

荧光PCR专用模板稀释液

CGMMV特异性引物-探针干粉

阳性对照(1×10⁷拷贝/μL)

使用手册

实验前准备

自备试剂与设备：

样品RNA

DEPC处理水

核酸提取试剂盒

实时荧光定量PCR仪

离心机、冰盒、移液器等实验室常规设备

操作流程

RNA提取(样本制备区)

使用自选方法提取纯化样品RNA，本试剂盒与多数市售核酸提取试剂盒兼容。

标准曲线制备(样本制备区)

标记6支离心管为7至2号

各管加入45μL DEPC水(建议使用带滤芯枪头)

7号管加入5μL阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)，震荡混匀得1×10⁷拷贝/μL标准品

依次稀释至6号管(1×10⁶拷贝/μL)、5号管(1×10⁵拷贝/μL)等，建立6点标准曲线

若仅需定性检测，稀释阳性对照至1×10⁵拷贝/μL即可

反应体系配制(试剂准备区)

根据待测样品数量(N)准备N+8个qPCR管(N样品+1阴性对照+6阳性对照+1空白)，按比例混合各组分。

模板添加(模板添加区)

每管加入2μL模板，加样顺序为：阴性对照(DEPC水)→待测样品→阳性对照，离心30秒混匀。

扩增程序(扩增及产物分析区)

将反应管置于qPCR仪中，运行以下程序：

逆转录：50°C 30分钟

预变性：95°C 10分钟

扩增循环(40次)：95°C 15秒 → 60°C 1分钟(采集荧光)

结果分析

定量分析：

以阳性对照浓度的对数值为横坐标，Ct值为纵坐标绘制标准曲线，通过样品Ct值计算病毒浓度。

定性判读标准：

阳性对照：Ct值<30，典型S型扩增曲线

阴性对照：Ct值>38或无Ct值

样品判定：

Ct值<38：阳性

Ct值>40：阴性

38≤Ct值≤40：需复检

注意事项

实验分区操作：样本处理、试剂配制、扩增分析应在独立区域进行

使用带滤芯枪头和一次性实验耗材

反应液避光保存，避免气泡干扰

所有组分使用前应充分融化混匀

实验后使用10%次氯酸或75%酒精消毒工作区

保存与运输

运输条件：低温运输

保存条件：-20℃避光保存

有效期：12个月

阳性对照需单独存放，避免污染

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