油菜源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

用于科研领域，检测样品中油菜源性成分的核酸，支持定性和定量分析。

核心特点

即开即用：用户仅需提供核酸模板，预混优化引物、探针及反应体系。

高灵敏度与特异性：针对油菜源性成分保守序列设计探针，避免交叉反应。

双重检测功能：

定性检测：通过Ct值判定阳性/阴性（Ct≤36为阳性，≥40为阴性）。

定量检测：标准曲线覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL），线性关系可靠。

内置对照：含无传染性DNA片段作为阳性对照，区分假阴性。

操作流程

标准曲线制备（定量检测需用）

标记6管，依次加入45μL稀释液，从阳性对照（10^7拷贝/μL）起始梯度稀释（10倍递减），获得10^6–10^1拷贝/μL系列浓度。

独立操作区完成，使用带滤芯枪头避免污染。

样本核酸提取

推荐配套RNA提取试剂（如柱式病毒RNAout），或兼容其他商业试剂盒。

设置阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。

荧光定量PCR反应

体系配置（20μL/反应）：

模板DNA 5μL

预混PCR Master Mix 10μL

引物/探针混合液 5μL

扩增程序：

95℃ 5min（预变性）

95℃ 15s → 60℃ 1min（40循环，荧光采集）

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本拷贝数。

定性分析：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36且扩增曲线正常。

样本Ct≤36判为阳性；≥40为阴性；36–40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止污染。

试剂处理：使用前充分离心混匀，避光保存；避免反复冻融（≤3次）。

实验安全：

穿戴一次性防护用具，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

运输与储存：

低温运输（泡沫箱加冰），-20℃保存；阳性对照单独存放。

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