禽白血病病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品用途

适用于禽类全血、含白细胞的血浆或血清、脾脏、肝脏、肾脏等样本中禽白血病病毒RNA的检测，用于临床病原学辅助诊断及科研。

检验原理

采用一步法荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和荧光探针靶向扩增ALV保守基因序列，实现高灵敏度的定量或定性检测。

试剂组成

（50T/盒规格）

ALV反应液：500μL×2管

酶混合液：50μL×1管

阳性质控品（无传染性DNA片段）：50μL×1管

阴性质控品：250μL×1管

荧光PCR专用模板稀释液：1mL×1瓶

注意：不同批号组分不可混用。

储存与运输

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。

运输要求：泡沫箱加冰密封低温运输，阳性质控品需单独放置以防污染。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500

安捷伦 MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf RealPlex

样本要求

采集类型：疑似感染禽类的全血、抗凝血浆/血清或组织（脾、肝、肾）。

保存与运输：样本需-20℃保存，低温运输，避免反复冻融。

操作注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止交叉污染。

试剂准备：使用前所有组分需完全融化，短暂离心混匀，反应液避光保存。

防污染措施：

使用一次性吸头、手套及专用工作服。

实验后工作台需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

扩增设置：避免气泡，确保管盖密封。

标准曲线制备（定量检测）

按10倍梯度稀释阳性质控品（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

每反应体系20μL，含5μL模板DNA。

性能参数

灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的ALV RNA。

特异性：引物探针针对ALV保守区设计，无交叉反应。

线性范围：定量检测覆盖5个数量级。

结果判读

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。

可疑：Ct值35~40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

局限性

仅限科研使用，临床诊断需结合其他指标。

样本质量（如降解或抑制物）可能影响结果。

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