荧光假单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

荧光假单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光探针（ssDNA-FQ）靶向荧光假单胞菌保守基因序列，结合CRISPR/Cas12a系统实现高灵敏度、高特异性检测。荧光信号强度与细菌浓度在10²–10⁸ CFU/mL范围内呈线性关系，检测限为1.0×10¹ CFU/mL。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板。

高灵敏度与特异性：优化引物及crRNA设计（如SEQ ID NO.1-3），避免与其他微生物DNA交叉反应。

双重检测模式：支持定性与定量分析，定量线性范围覆盖5个数量级。

内控设计：包含阳性对照，有效排除假阴性干扰。

兼容性：适配多数核酸提取试剂盒，适用于20μL反应体系（50次检测）。

组分清单

PCR扩增引物对（SEQ ID NO.1-2）

CRISPR/Cas12a检测组分（crRNA SEQ ID NO.3、Cas12a蛋白）

荧光探针ssDNA-FQ

阳性对照DNA

反应缓冲液、酶混合物

操作步骤

1. DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA，建议在独立样本制备区操作。

2. 标准曲线制备（定量检测适用）

标记6支离心管（编号7至2），依次梯度稀释阳性对照至10²–10⁷ CFU/mL浓度范围。

稀释需在专用区域进行，避免污染。

3. PCR反应体系配置（反应配制区）

按20μL体系混合：DNA模板、引物、探针、缓冲液及酶。

反应程序：预变性（95℃, 5min）→ 循环扩增（95℃ 10s, 60℃ 30s，40次），于525nm检测荧光信号。

4. 数据分析

定性检测：Ct值≤35判为阳性。

定量检测：根据标准曲线计算样本浓度。

注意事项

避免试剂反复冻融，分装保存。

不同批次组分不可混用。

实验废弃物需按生物危险品处理。

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