同猪疱疹病毒2型)猪巨细胞病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I 荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术（qPCR）特异性检测猪疱疹病毒2型（SuHV-2，即猪巨细胞病毒）的核酸。适用于猪血清、组织样本（如肺、淋巴结、唾液腺）或细胞培养物中的病毒DNA定量分析，具有高灵敏度、高特异性和快速检测等特点。

检测原理

样本DNA提取：从样本中提取病毒DNA。

qPCR扩增：

使用特异性引物靶向SuHV-2保守基因区域（如gB基因）。

SYBR Green I染料嵌入双链DNA中，荧光信号随扩增产物增加而增强。

实时监测：通过荧光定量PCR仪动态监测扩增曲线，结合标准曲线计算病毒载量（copies/μL）。

组分列表（48T规格）

| 组分 | 体积/数量 | 保存条件 |

| qPCR预混液（含SYBR Green I） | 1 mL × 1管 | -20℃避光 |

| SuHV-2特异性引物混合液 | 100 μL × 1管 | -20℃ |

| DNA提取试剂（裂解液+蛋白酶K） | 各1套 | -20℃ |

| 阳性对照（SuHV-2质粒） | 50 μL × 1管 | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 1 mL × 1管 | -20℃ |

| RNase-Free DNase/RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室温 |

操作步骤

1. 样本DNA提取

取200 μL血清或30 mg组织匀浆液，按DNA提取试剂盒说明操作，最终溶于50 μL无核酸水。

2. qPCR反应体系配制（25 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| qPCR预混液 | 12.5 μL |

| 引物混合液 | 2.0 μL |

| 模板DNA | 5.0 μL |

| 无核酸水 | 补至25 μL |

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 无 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 每循环结束时 |

| | 60℃ | 30 sec | | |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 | 连续 |

结果判读

阳性：

Ct值 ≤ 35，且熔解曲线为单一峰值（Tm值约 85±1℃）。

可疑：

35 < Ct值 < 38，建议重复检测。

阴性：

Ct值 ≥ 38 或无扩增曲线。

注意：阴性对照应无扩增，阳性对照Ct值需在15~25之间。

性能参数

灵敏度：最低检测限10 copies/μL

特异性：不感染猪圆环病毒（PCV）、猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病毒（PRV）等。

重复性：CV值 < 5%（批内/批间）。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

试剂使用前彻底解冻混匀，避免反复冻融。

熔解曲线分析可区分非特异性扩增。

适用于科研用途，临床诊断需经当地法规许可。

保存与运输

保存条件：-20℃避光，有效期12个月。

运输：冰袋低温运输。

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