马流感病毒H3N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

马流感病毒H3N8亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光RT-PCR技术，针对马流感病毒H3N8亚型的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）基因保守区域设计特异性引物。通过逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA，再经荧光定量PCR扩增目标片段，实时监测荧光信号强度，实现病毒核酸的定性与定量检测。

主要组分

RT-PCR预混液：含逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系。

SYBR Green荧光染料：嵌合双链DNA释放荧光信号。

阳性对照：灭活马流感病毒H3N8亚型RNA。

阴性对照：无核酸酶水。

引物混合液：H3N8亚型特异性引物对。

样本要求

样本类型：鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液或组织匀浆液。

采集与保存：使用病毒运输培养基（VTM）保存，2-8℃冷藏运输（72小时内检测），长期保存需-70℃以下冻存。

核酸提取：推荐采用磁珠法或柱式法提取RNA，提取后立即检测或-20℃短期保存。

操作步骤

反应体系配制：按20μL/孔分装预混液，加入5μL模板RNA。

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

循环扩增（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

数据分析：通过Ct值判定结果，标准曲线法计算病毒载量（拷贝数/mL）。

结果判读

阳性：Ct值≤38且扩增曲线呈典型S型。

可疑：Ct值38-40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值>40。

质量控制

每批次需包含阳性对照（Ct≤35）、阴性对照（无扩增）及空白对照。

批内变异系数（CV）应<5%，扩增效率需达90%-110%。

注意事项

实验需在BSL-2实验室进行，废弃物需高压灭菌处理。

避免反复冻融样本，防止RNA降解。

本试剂盒仅限兽医诊断或科研使用，不可用于临床治疗决策。

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