耶氏肺孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

耶氏肺孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

科研使用，适用于耶氏肺孢子虫的定性及定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化的引物设计可检测低至10³拷贝/μL的模板，无需增菌。

特异性强：引物基于保守序列设计，与其他病原体无交叉反应。

即开即用：预混PCR反应液（含染料），仅需提供DNA模板。

双重检测功能：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

内控设计：提供阳性对照（非活体DNA片段），避免假阴性干扰。

包装组分

| 编号 | 成分 | 规格/包装 | 备注 |

| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | 含荧光染料、dNTPs |

| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL（亮黄色） | 稀释模板用 |

| 试剂三 | 引物混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性引物及探针 |

| 试剂四 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | 非传染性DNA片段 |

| —— | 说明书 | 1份 | 含操作流程及数据分析方法 |

操作流程

1. 阳性对照稀释（示例：10²~10⁷梯度）

在独立洁净区操作，避免污染。

取6管，分别标记为2~7号，每管加45 μL模板稀释液。

7号管加5 μL原液（10⁸拷贝/μL），涡旋混匀得10⁷拷贝/μL梯度，依次稀释至10²拷贝/μL。

2. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR MagicMix 3.0 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| 超纯水 | 6 |

3. 扩增程序（以常见仪器为例）

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

溶解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。

注意事项

避免污染：阳性对照与样本分区域操作，使用带滤芯枪头。

质量控制：每批实验需包含阴性对照（超纯水替代模板）。

数据判读：Ct值≤35且溶解曲线单峰视为阳性。

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