赭曲霉染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于赭曲霉（Aspergillus ochraceus）核酸的定性与定量检测。通过优化引物设计及反应体系，确保高灵敏度（检测限低至100拷贝/反应）和高特异性，避免与其他病原体DNA交叉反应。适用于科研用途，兼容主流荧光定量PCR仪。

检验原理

采用SYBR Green等荧光染料实时监测PCR扩增过程。当反应体系中存在赭曲霉特异性靶序列时，引物与模板结合并扩增，释放荧光信号。通过仪器动态监测荧光强度，实现靶标核酸的定性与定量分析。

试剂盒组成

赭曲霉扩增预混液：25 μL ×1管（含dNTPs、酶、缓冲液等）

荧光染料反应液：975 μL ×1管

阳性质控品：50 μL（1×10^8拷贝/μL，用于标准曲线制备）

阴性质控品：50 μL（DEPC-H2O，用于污染监测）

说明书：1份

注意事项：

不同批号组分不可混用。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

操作步骤

1. DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管，编号7至2，每管加45 μL DEPC-H2O。

7号管加5 μL阳性质控品（1×10^8拷贝/μL），涡旋混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至1×10^2拷贝/μL（6号至2号管），每步更换枪头。

3. PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 荧光染料反应液 | 10 |

| 扩增预混液 | 2 |

| 模板DNA/标准品 | 5 |

| DEPC-H2O | 3 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃/3 min | 1 |

| 变性 | 95℃/15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃/30 sec | |

5. 数据分析

定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

定量：以标准曲线计算拷贝数。

适用仪器

ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler等荧光定量PCR仪。

性能参数

线性范围：1×10^2~1×10^7拷贝/反应（R²≥0.99）。

特异性：不与黑曲霉、黄曲霉等常见真菌交叉反应。

注意事项

实验分区操作（样本制备区、扩增区），避免污染。

阴性质控品应无扩增信号，否则需排查污染。

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