隐孢子虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对隐孢子虫属（Cryptosporidium spp.）基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量检测。分析灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级，特异性强，无交叉反应。

试剂组成

隐孢子虫扩增预混液（含酶、dNTPs、缓冲液等）

隐孢子虫特异性引物混合液

阳性质控品（含靶基因片段）

阴性质控品（无核酸酶水）

说明书

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（建议≤7次），有效期12个月。运输需低温（-20℃或冰袋）。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler系列

Agilent MX3000P/3005P

Eppendorf Mastercycler ep realplex

自备耗材与设备

无核酸酶离心管（0.2mL PCR管、1.5mL离心管）

滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）

离心机、涡旋振荡器、移液器

样品要求

样本类型：粪便、水体滤膜提取物或培养物，需符合《微生物样本采集规范》。

保存条件：短期（1周内）可存于-20℃，长期需-70℃以下，避免反复冻融。

运输：2~8℃冰袋运送，确保冷链完整性。

使用方法

样本处理（样本处理区）：

按标准方法提取样本DNA，建议使用商业核酸提取试剂盒。

PCR反应体系配制（试剂准备区）：

按说明书比例混合扩增预混液、引物及模板DNA。

上机检测（扩增区）：

设置扩增程序：预变性（95℃, 2min）→循环阶段（95℃ 15s, 60℃ 30s, 40次循环）→熔解曲线分析。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰值与阳性质控一致；

阴性：无扩增曲线或Ct值＞38。

注意事项

不同批号试剂不可混用，避免污染。

实验需分区操作（样本处理、试剂配制、扩增分析）。

建议每批次实验同步运行阴阳性质控。

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