小隐孢子虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品用途

用于科研实验中Cryptosporidium parvum（小隐孢子虫）DNA的定性或定量检测，适用于环境样本、临床样本或其他生物样本的病原体筛查。

主要组分

预混PCR Master Mix：含SYBR Green荧光染料、dNTPs、热启动Taq DNA聚合酶及优化缓冲体系。

特异性引物：针对Cryptosporidium parvum高度保守区域设计，确保灵敏性（检测限达100拷贝/反应）和特异性（无交叉反应）。

阳性对照：含靶序列的质粒DNA，用于实验质控。

阴性对照：无核酸酶水，排除污染干扰。

自备试剂与仪器

样本要求：需提供提取的DNA模板（纯度A260/A280建议1.8-2.0）。

适用仪器：

ABI系列（如7500、StepOnePlus）、安捷伦MX3000P/3005P、Roche LightCycler、Bio-Rad CFX、Eppendorf RealPlex等荧光定量PCR仪。

检验原理

基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过检测扩增过程中荧光信号变化，实时定量靶标DNA浓度。线性范围覆盖至少5个数量级，支持绝对定量（需标准曲线）或相对定量分析。

操作步骤

反应体系配制：按20μL/反应混合模板DNA、预混液及引物。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟；

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，升温速率0.3℃/秒。

数据分析：通过阈值循环数（Ct值）及熔解曲线峰型判定结果。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

实验需在无菌环境下操作，防止气溶胶污染。

定量分析时需同步运行标准品（需另购或自制）。

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