人类嗜T淋巴细胞病毒1型前病毒染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，针对HTLV-1基因组高度保守区域设计特异性引物和探针，通过实时监测荧光信号实现病毒核酸的定性检测。适用于临床样本、科研实验中HTLV-1前病毒DNA的定量分析。

试剂盒组分

荧光定量PCR反应液（含引物、探针、dNTPs、缓冲体系等）

阳性对照（非传染性DNA片段，1E7拷贝/μL）

阴性对照（无模板对照，NTC）

荧光RT-PCR专用模板稀释液

使用说明书

操作步骤

1. 样本准备

待测样本需提取DNA，建议浓度≥50 ng/μL，OD260/280为1.8-2.0。

阳性对照需按10倍梯度稀释（1E1-1E6拷贝/μL），方法如下：

标记6管，分别加入45 μL稀释液。

取5 μL阳性对照（1E7拷贝/μL）加入第一管（1E6拷贝/μL），混匀后依次稀释至1E1拷贝/μL。

2. PCR反应体系配制

每反应需加入：

10 μL反应液

5 μL模板DNA（样本/对照）

补足至20 μL体系（需避光操作）。

短暂离心去除气泡，管盖需密封严实。

3. 上机检测

设置荧光定量PCR仪参数：

预变性：95℃ 3分钟

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）。

使用FAM通道检测荧光信号。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。

防护措施：使用一次性吸头、手套及专用工作服，实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

试剂保存：反应液避光保存，所有组分使用前需完全融化并混匀。

废弃物处理：实验废弃物按《微生物生物医学实验室生物安全通则》处置。

结果分析

阈值设定：以基线信号3倍标准差为阈值（Ct值）。

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈“S”型；阴性样本无典型扩增曲线。

定量计算：以标准曲线（Ct值-log拷贝数）计算样本病毒载量。

性能参数

检测限：1E1拷贝/μL

特异性：不与HTLV-2或其他常见病原体交叉反应。

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