溃蚀齿密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒

溃蚀齿密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检测原理

采用 SYBR Green I 荧光染料法：

特异性引物扩增靶标基因（如 tlyA 或 nox 基因）

SYBR Green 嵌入双链DNA，释放荧光信号

实时监测扩增曲线，实现靶标核酸定量检测

应用范围

猪痢疾（Swine Dysentery）的病原体检测

粪便、肠道内容物、组织样本中的T. hyodysenteriae核酸

适用于兽医诊断、养殖场疫病监控、科研

试剂盒组分

| 组分 | 体积/数量 |

| qPCR 预混酶（含SYBR Green） | 1.0 mL × 1 管 |

| 溃蚀齿密螺旋体引物混合液 | 100 μL × 1 管 |

| DNA 提取阳性对照 | 50 μL × 1 管 |

| 无核酸酶水 | 1 mL × 1 管 |

| RNase-Free DNase/RNase 管 | 48/96 个 |

操作流程

1. 样本处理

取粪便/组织样本，按DNA提取试剂盒（需自备）提取总DNA

2. PCR反应体系配制（20 μL）

| 组分 | 体积 |

| qPCR 预混酶 | 10 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 2 μL |

| 无核酸酶水 | 补足至 20 μL |

3. 扩增程序（推荐）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 熔解曲线分析 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升 | 1 |

结果判读

阳性：扩增曲线呈“S”型，Ct值 ≤ 35.0

阴性：无扩增曲线（或 Ct值 > 38.0）

熔解曲线：单一峰（Tm值 ≈ 83±1℃）验证特异性

性能参数

灵敏度：≥ 10 copies/μL

特异性：不与猪密螺旋体（T. suis）、大肠杆菌等交叉反应

重复性：CV值 ≤ 5%

注意事项

实验室分区操作（样本处理区/PCR区）

使用无菌RNase-free耗材

阳性对照与样本分时操作，避免气溶胶污染

熔解曲线必做，排除非特异性扩增

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