猪嵴病毒(库布病毒)染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green荧光定量RT-PCR技术，专用于猪嵴病毒（Porcine Kobuvirus, PKV）的快速检测，具备高灵敏度和特异性，适用于临床样本、流行病学调查及科研领域的定性或定量分析。

检测原理

通过逆转录酶将病毒RNA转化为cDNA，利用特异性引物扩增靶序列，SYBR Green染料实时结合双链DNA产物并释放荧光信号。通过Ct值与标准曲线对比，实现病毒RNA的定量或定性分析。

试剂盒组成

反应体系组分

RNA裂解液

逆转录酶混合液（PrimeScript RT Enzyme Mix I）

逆转录反应液

荧光定量PCR预混液（SYBR Premix Ex Taq II）

特异性引物（F/R）

对照品

标准阳性模板（梯度浓度）

阴性对照品

辅助材料

封板膜、说明书等

样本处理

采集与保存

样本类型：粪便、肠道组织或分泌物等，按常规方法采集。

保存条件：-20℃以下，避免反复冻融，保存期1年。

运输要求

低温运输（泡沫箱加冰袋密封），阳性对照需独立包装以防污染。

操作步骤

RNA提取：使用裂解液提取样本RNA，建议在冰上操作。

逆转录：按说明书配制反应体系，42℃反应15分钟。

荧光定量PCR

程序设置：预变性95℃ 30秒；扩增40循环（95℃ 5秒，60℃ 30秒）。

熔解曲线分析：验证扩增特异性。

结果判读

定量检测

以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本病毒载量。

定性检测

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤35判为阳性；Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

分区操作：RNA提取、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

试剂保存：未使用组分需-20℃避光保存，避免反复冻融。

性能参数

检测限：≤100拷贝/μL

反应时间：≤3小时（含样本处理）

特异性：与猪细小病毒（PPV）等常见病原体无交叉反应。

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